EMSA中紫外交聯(lián)時間怎么確定？將尼龍膜置于濾紙上干燥片刻，在紫外交聯(lián)儀中將轉(zhuǎn)有DNA的一面向上用120mJ/cm2能量輻照交聯(lián)，紫外交聯(lián)儀的紫外傳感器會根據(jù)當(dāng)前紫外交聯(lián)儀的紫外線強(qiáng)度自動計算輻照時間，當(dāng)輻照能量達(dá)到設(shè)定值時候，會自動停止輻照。

紫外照射的目的在于使DNA 中的一小部分T 與膜表面帶正電的氨基基團(tuán)之間形成交聯(lián)(Church and Gilbert 1984)。紫外照射不能過度,否則將造成堿基T之間發(fā)生共價結(jié)合而降低雜交信號。交聯(lián)時將膜上帶有DNA的一面朝向紫外光源。 

EMSA紫外交聯(lián)時間設(shè)置方法：

紫外交聯(lián)儀設(shè)置時間的步驟：按壓智能紫外交聯(lián)儀UCL-3500操作面板上program按鍵，選擇時間模式，通過數(shù)字按鍵，輸入需要照射的時間，然后按壓enter按鍵，這樣需要的交聯(lián)時間就成功設(shè)置好了，按star按鍵，紫外交聯(lián)儀開始輻照，屏幕顯示倒計時時間，交聯(lián)時間結(jié)束后，交聯(lián)儀紫外燈自動停止運(yùn)行。

EMSA紫外交聯(lián)能量

智能紫外交聯(lián)儀UCL-3500可用于Northern、EMSA blotting、EMSA等膜交聯(lián),當(dāng)使用254 nm波長、能量為120.0mJ/cm2交聯(lián)時,尼龍模的氨基和DNA的胸腺嘧啶(或RNA的尿嘧啶)之間形成共價鍵穩(wěn)定。

EMSA紫外交聯(lián)能量設(shè)置方法：

按壓智能紫外交聯(lián)儀操作面板上program按鍵，選擇能量模式(energy)，通過數(shù)字按鍵，輸入需要照射的能量（0.120J/cm2），然后按壓enter按鍵，這樣需要的交聯(lián)能量就成功設(shè)置好了，按star按鍵，紫外交聯(lián)儀開始輻照，屏幕顯示剩余能量，交聯(lián)時間結(jié)束后，交聯(lián)儀紫外燈自動停止運(yùn)行。